Innehåll
Forskare använder serieutspädningar (en serie med 1:10 utspädningar) för att beräkna befolkningstätheten för bakteriekulturer. När en droppe kultur som innehåller ett litet antal bakterier pläteras och inkuberas kommer varje cell teoretiskt att vara tillräckligt långt borta från andra celler att den kommer att bilda sin egen koloni. (I verkligheten kan vissa kolonier komma till två celler i närheten, men detta är sällsynt i utspädda kulturer, och så är antalet kolonier en mycket bra uppskattning av antalet celler som ursprungligen överfördes till plattan.) Eftersom befolkningstätheten är okänt, måste en mängd utspädningar användas för att hamna på en platta med ett lämpligt antal kolonier.
Seriella utspädningar
Märk de sex provrören (som vardera innehåller 9 ml tillväxtmedium) som 1 till 6. Märk de sex agarplattorna som 1 till 6. Använd en pipetter och sterila 1 ml pipettspetsar för att överföra 1 ml bakteriekultur till röret 1.
Blanda väl och överför 1 ml från rör 1 till rör 2 med en pipetter och sterila 1 ml spetsar.
Upprepa steg 2 för de återstående rören och överför varje gång 1 ml från det senast använda röret till nästa rör.
Använd en pipetter och sterila 0,1 ml spetsar för att överföra 0,1 ml från röret 1 till en agarplatta. Flamma en L-formad glasstav och använd den för att sprida droppen jämnt runt plattan. Inkubera plattan i 48 timmar vid en lämplig temperatur för de bakterier som används. Olika typer av bakterier har olika optimala tillväxttemperaturer. Om du inte kan hitta den optimala tillväxttemperaturen med referensmaterial, försök att inkubera plattorna vid 25 och 37 grader.
Upprepa steg 4, varje gång överför vätska från ett annat provrör till dess motsvarande platta.
Befolkningsberäkningar
Observera de sex plattorna och välj en med 30 till 200 isolerade kolonier.
Multiplicera antalet kolonier på plattan med 10 för att beräkna antalet celler per ml kultur från det använda utspädningsröret.
Multiplicera antalet från steg 2 med 10 ^ (plattnummer) för att beräkna antalet celler per ml ursprungskultur. Värdet på 10 ^ (plattnummer) är utspädningsfaktorn för kulturen som används för att inokulera den plattan.