Innehåll
Biokemi studerar molekyler som DNA, RNA och proteiner. Blotting tekniker är vad forskare använder för att separera dessa typer av molekyler. I celler finns de som en blandning. Blotting gör det möjligt för forskare att hitta ett protein bland många, som en nål i en höstack. Blotting görs vanligtvis genom att låta en blandning av DNA, RNA eller protein flöda genom en gelplatta. Denna gel gör det möjligt för små molekyler att röra sig snabbare än större. De separerade molekylerna pressas sedan mot ett membran, vilket hjälper till att flytta molekylerna från gelén till membranet. Molekylerna fastnar vid membranet, men förblir på samma plats, bortsett från varandra, som om de fortfarande var i gelén.
Western Blot
Western blotting är en vanlig teknik för att separera proteiner efter storlek, men i raka kolumner. Dessa parallella kolumner gör det möjligt för forskare att jämföra mängden protein över olika prover som körs bredvid varandra, som bowlingbanor. Om du till exempel testade effekten av olika mängder av ett läkemedel på celltillväxt, skulle du behandla fyra olika grupper av celler med en annan mängd läkemedel. Sedan kan du bryta cellerna öppna och köra proteinerna från varje grupp i separata körfält på en gel. Genom att sprida proteinerna på detta sätt kan du se vad en ökande koncentration av läkemedel gör mot ett visst protein.
Northern Blot
Northern blotting används för att detektera RNA. Celler kan brytas öppna för att släppa sitt RNA. RNA från olika celltyper kan köras på separata körfält på en gel. Gelén sprider olika RNA efter storlek. Dessa snygga, parallella rader av RNA tillåter en forskare att jämföra vilken celltyp som har hur mycket av vilket RNA. Denna metod gör det möjligt för en forskare att bestämma om celler från en viss sjukdom har mer av detta RNA eller mindre av det RNA. Northern blotting kan avslöja hur en sjukdom fungerar i nivå med RNA-produktion.
Södra blotten
Södra blotting är den ursprungliga blotting tekniken, som startade namnsystemet. Det uppfanns av Edwin Southern. Southern blot används för att detektera mängden DNA i en blandning. Precis som med protein och RNA, kan en cells DNA släppas när den cellen bryts upp. Södra blotting separerar DNA från olika celltyper efter storlek. DNA från varje prov sprids i snygga, parallella körfält. Enskilda DNA-delar kan detekteras med hjälp av en radioaktiv eller fluorescerande sond, som är utformad för att endast binda till den biten av DNA. Energisignalen från en radioaktiv sond, eller ljusblink från en lysrörssignal, säger forskare hur mycket av den biten av DNA som finns i varje prov.
Andra blotting
De tre huvudsakliga blottingteknikerna - västra, norra och södra - har modifierats på olika sätt för att detektera något olika molekyler. Western blot kontra Southern blot, till exempel. detekterar protein respektive DNA. Varje modifierad teknik utförs vanligtvis på vanligt sätt, men använder en annan metod för att detektera molekylen som sprids ut i de parallella banorna. Sydvästliga blotting upptäcker molekyler av protein som fastnat vid DNA. Nordvästliga blotting upptäcker molekyler av protein som fastnat vid RNA. Farwestern blotting upptäcker molekyler av protein som klistrar fast vid andra proteiner.