Hur man beräknar den katalytiska effektiviteten

Innehåll

• Enzym Basics
• Enzymkinetik
• Betygsätt konstanter
• Michaelis konstant och enzymeffektivitet

Enzymer är proteiner i biologiska system som hjälper till att snabba reaktioner som annars skulle äga rum mycket långsammare än utan hjälp av enzymet. Som sådan är de en slags katalysator. Andra, icke-biologiska katalysatorer spelar en roll i industrin och på andra håll (till exempel hjälper kemiska katalysatorer till förbränning av bensin för att förbättra gasdrivna motorers kapacitet). Enzymer är emellertid unika i sin mekanism för katalytisk verkan. De arbetar genom att sänka reaktionsaktiveringsenergin utan att ändra reaktanternas energitillstånd (ingångarna till en kemisk reaktion) eller produkterna (utgångarna). Istället skapar de i själva verket en jämnare bana från reaktanter till produkter genom att sänka mängden energi som behöver "investeras" för att få en "retur" i form av produkter.

Med tanke på enzymernas roll och det faktum att många av dessa naturligt förekommande proteiner har valts för human terapeutisk användning (ett exempel är laktas, det enzym som hjälper till att smälta mjölksocker som miljontals människors kroppar inte producerar), det är inte förvånande att biologer har kommit med formella verktyg för att bedöma hur väl specifika enzymer gör sina jobb under givna, kända förhållanden - det vill säga bestämma deras katalytiska effektivitet.

Enzym Basics

En viktig egenskap hos enzymer är deras specificitet. Enzymer, generellt sett, tjänar till att katalysera endast en av de hundratals biokemiska metaboliska reaktioner som alltid utspelas i människokroppen. Således kan ett givet enzym betraktas som ett lås, och den specifika förening på vilken det verkar, kallad ett substrat, kan liknas med en nyckel. Den del av enzymet som ett substrat interagerar med är känt som det aktiva stället för enzymet.

Enzymer, som alla proteiner, består av långa strängar av aminosyror, av vilka det finns cirka 20 i mänskliga system. De aktiva ställena för enzymer består därför vanligtvis av aminosyrarester, eller kemiskt ofullständiga bitar av en given aminosyra, som kan "saknas" en proton eller annan atom och har en elektrisk nettoladdning som resultat.

Enzymer förändras kritiskt inte i de reaktioner de katalyserar - åtminstone inte efter att reaktionen är över. Men de genomgår tillfälliga förändringar under själva reaktionen, en nödvändig funktion för att tillåta reaktionen att gå vidare. För att föra lås-och-nyckelanalogin vidare, när ett substrat "hittar" det enzym som krävs för en given reaktion och binder till enzymernas aktiva plats ("nyckelinsättning"), genomgår enzym-substratkomplexet förändringar ("tangentvridning" ") som resulterar i frisläppandet av en nybildad produkt.

Enzymkinetik

Interaktionen mellan substratet, enzymet och produkten i en given reaktion kan representeras på följande sätt:

E + S ⇌ ES → E + P

Här, E representerar enzymet, S är substratet, och P är produkten. Således kan du föreställa dig processen som löst besläktad med en klump av modellerande lera (S) blir en helt formad skål (P) under påverkan av en mänsklig hantverkare (E). Hantverkarnas händer kan betraktas som den aktiva platsen för det "enzymet" som denna person förkroppsligar. När den lummiga leran blir "bunden" till personens händer bildar de ett "komplex" under en tid, under vilken leran formas till en annan och förutbestämd form genom handlingen av handen till vilken den är förenad (ES). När skålen sedan är helt formad och inget ytterligare arbete behövs, händerna (E) släpp skålen (P) och processen är klar.

Tänk nu på pilarna i diagrammet ovan. Du kommer att märka att steget mellan E + S och ES har pilar som rör sig i båda riktningarna, vilket antyder att, precis som enzym och substrat kan binda samman för att bilda ett enzym-substratkomplex, kan detta komplex dissocieras i den andra riktningen för att frigöra enzymet och dess substrat i sina ursprungliga former.

Den riktningspilen mellan ES och På andra sidan visar att produkten P går aldrig spontant med det enzym som är ansvarigt för skapandet. Detta är vettigt mot bakgrund av den tidigare noterade specificiteten hos enzymer: Om ett enzym binder till ett givet substrat, binder det inte också till den resulterande produkten eller annars skulle enzymet då vara specifikt för två substrat och därmed inte specifikt alls. Ur ett sunt förnuftsynpunkt skulle det också vara vettigt för ett givet enzym att göra en given reaktion fungera mer fördelaktigt i både riktningar; detta skulle vara som en bil som rullar med både uppåt och nedförs med lika lätthet.

Betygsätt konstanter

Tänk på den allmänna reaktionen i föregående avsnitt som summan av tre olika konkurrerande reaktioner, som är:

1) ; E + S → ES 2) ; ES → E + S 3) ; ES → E + P

Var och en av dessa individuella reaktioner har sin egen hastighetskonstant, ett mått på hur snabbt en given reaktion fortskrider. Dessa konstanter är specifika för speciella reaktioner och har experimentellt bestämts och verifierats med avseende på en mängd olika grupper av substrat-plus-enzym och enzym-substrat-komplex-plus-produkter. De kan skrivas på olika sätt, men generellt uttrycks hastighetskonstanten för reaktion 1) ovan k₁, det av 2) som k_-1och det av 3) som k₂ (detta skrivs ibland k_katt).

Michaelis konstant och enzymeffektivitet

Utan att dyka in i beräkningen som behövs för att härleda några av ekvationerna som följer, kan du antagligen se att hastigheten vid vilken produkten ackumuleras, v, är en funktion av hastighetskonstanten för denna reaktion, k₂och koncentrationen av ES närvarande, uttryckt som. Ju högre hastighetskonstanten och desto mer substrat-enzymkomplex, desto snabbare ackumuleras den slutliga reaktionsprodukten. Därför:

v = k_2

Kom dock ihåg att två andra reaktioner förutom den som skapar produkten P förekommer samtidigt. En av dessa är bildandet av ES från dess komponenter E och Smedan den andra är samma reaktion i omvänd riktning. Samlar all denna information och förstår att bildningsgraden för ES måste motsvara dess försvinnningshastighet (genom två motsatta processer), har du

k_1 = k_2 + k _ {- 1}

Dela båda villkoren med k₁ utbyten

= {(k_2 + k _ {- 1}) ovan {1pt} k_1}

Eftersom alla "k"termer i denna ekvation är konstanter, de kan kombineras till en enda konstant, K_M:

K_M = {(k_2 + k _ {- 1}) ovan {1pt} k_1}

Detta gör att ekvationen ovan kan skrivas

= K_M

K_M är känd som Michaelis-konstanten. Detta kan betraktas som ett mått på hur snabbt enzym-substratkomplexet försvinner via kombinationen av att bli obundet och ny produkt som bildas.

Gå tillbaka till ekvationen för produktbildningens hastighet, v = k₂, substitution ger:

v = Bigg ({k_2 ovan {1pt} K_M} Bigg)

Uttrycket inom parentes, k₂/K_M, är känd som specificitetskonstanten _, _ även kallad kinetisk effektivitet. Efter all denna irriterande algebra har du äntligen ett uttryck som bedömer den katalytiska effektiviteten, eller enzymeffektiviteten, för en given reaktion. Du kan beräkna konstanten direkt från enzymkoncentrationen, koncentrationen av substrat och produktbildningens hastighet genom att omarrangera till:

Bigg ({k_2 ovan {1pt} K_M} Bigg) = {v ovan {1pt}}