Innehåll
Högpresterande vätskekromatografi är en teknik för laboratorieanalys av en blandning. Det är en effektiv typ av kromatografi som använder högt tryck, snarare än helt enkelt tyngdkraft, för att driva ett prov av en blandning genom en kolonn. Ett prov injiceras, sedan hjälper en pump som innehåller stora mängder tryck att flytta provet längs en packad kolonn, där det separeras i enskilda komponenter. Denna separering analyseras sedan av en detektor för att ge resultat.
Injektionsplats
För att injiceras i en HPLC måste ett prov först lösas i ett polärt flytande lösningsmedel, företrädesvis ett med kända HPLC-spektra, så att dess data kan skiljas från proverna. Den flytande lösningen som innehåller provet placeras i instrumentet och skickas in i kolonnen. Injektionsställets faktiska placering beror på instrumentets märke. I de flesta fall automatiseras injektionsprocessen, men i vissa fall måste en labbarbetare injicera provet med en liten sprutnål.
Pumpkomponent
HPLC-enhetens pumpkomponent är nödvändig eftersom den ger trycket som driver provet genom kolonnen. Pumpstyrkan varierar, men en kraftfull kan producera ett tryck på upp till 6 000 psi, eller pund per kvadrat tum, som appliceras efter att provet injicerats. Detta tillåter provet att passera genom kolonnen snabbare och mer effektivt än om det skulle droppa genom att använda endast tyngdkraften.
Kolumnbeskrivning
Den ökade hastigheten hos ett prov som passeras genom kolonnen av en pump möjliggör användning av en annan typ av kolonn än de som används i enkel vätskekromatografi. Förpackningsmaterialet i kolonnen kan ha en mycket mindre partikelstorlek, vilket ökar ytarean och därför hjälper provets växelverkan med kolonnen. De flesta HPLC-kolumner fungerar genom polaritet. Provet löses i ett polärt lösningsmedel, och kolonnen består av i stort sett icke-polära kolväten. De polära delarna av provmolekylen passerar mycket snabbt genom kolonnen eftersom de primärt samverkar med lösningsmedlet, medan de icke-polära komponenternas prover kvarstår i kolonnen och bildar svaga interaktioner med kolonnkomponenterna. Därför kommer provkomponenterna från kolonnen i ordning från de flesta polära till de flesta icke-polära.
Detektorfunktion
Detektorer varierar också beroende på vilken typ av HPLC-instrument som används. De flesta fungerar dock på samma grundläggande sätt. En källa för ultraviolett ljus lyser på de separerade provkomponenterna när de kommer från kolonnen. De flesta organiska föreningar absorberar en viss mängd ljus, så när de passerar vid den applicerade ljusstrålen kan en detektor ta upp hur mycket ljus som absorberas. Detektorn registrerar också komponenterna för kvarhållning baserat på i vilken ordning de kommer från kolumnen. Denna utgång kan sedan analyseras baserat på toppområdet för att bestämma den exakta naturen hos provkomponenterna.