Innehåll
- Utspädningsprover, plätering och inkubation
- Manuell räkning
- Automatisk räkning
- Att göra räkningen mer komplicerad
Ett av de klassiska sätten att bestämma koncentrationen av mikrober i ett prov är att späda provet, odla mikroberna på plattor och räkna kolonierna. De pläterade mikroberna växer från en kolonibildande enhet bestående av en eller flera celler till en synlig koloni som kan ses och räknas. Bakterier är den vanligaste mikroben för att utvärdera med hjälp av plattantal. Koloniträden används för att upptäcka och räkna mikrober i jord, vatten och mat. Protokoll för att räkna kolonier betonar en korrekt och metodisk metod.
Utspädningsprover, plätering och inkubation
Om du helt enkelt smetar ett mikrobprov på en agarplatta ser du så många kolonibildande enheter att de enskilda kolonierna kommer att smälta samman, vilket gör dem omöjliga att räkna. För att lösa detta problem, bland provet i ett flytande medium, ta en liten mängd av den blandningen och späd det ytterligare. Upprepa den här processen sex till tio gånger. Sprid den slutliga utspädningen på en agarplatta och inkubera den i fyra till sju dagar innan du räknar kolonierna.
Manuell räkning
Det huvudsakliga tricket för att räkna kolonier är att räkna varje kolonipunkt en gång. Ett tillvägagångssätt är att ställa in petriskålen på en rutnätbakgrund och räkna kolonierna i varje rutcell och flytta i ett metodiskt mönster genom alla cellerna. Att markera räknade kolonier på baksidan av petriskålen kan också vara ett användbart tillvägagångssätt. Generellt måste du räkna minst tre plattor; använd bara plattor som innehåller 30 till 300 kolonier för att göra starka slutsatser, föreslår Microbiology Network, ett företag som tillhandahåller konsulttjänster till laboratorier och tillverkare. Tallrikar med kolonier som är för många att räkna eller med för få kolonier behöver ompläteras från en ny utspädning.
Automatisk räkning
Mänskligt fel ökar tiden för att manuellt räknar kolonier. För att förbättra både noggrannhet och effektivitet, placera Petri-skålen i en automatisk räkneapparat. Automatiserade koloniträknare tar en bild av skålen, separerar kolonierna från bakgrunden och använder sedan en algoritm för att räkna kolonierna på plattan. Algoritmerna kan ha svårigheter att skilja kolonier när två eller flera kolonier rör vid kanterna, så detta är ett område med pågående programvaruutveckling.
Att göra räkningen mer komplicerad
Noggrannheten för att beräkna mikrotäthet från koloniträden har vissa begränsningar. Kolonibildande enheter kan vara en enda cell, en cellkedja eller en hel cellklump. Antagandet är att en koloni representerar en cell, så koncentrationer beräknade från koloniträden kan vara låga. Olika mikrober behöver olika tillväxtförhållanden, och kolonierna på plattan representerar endast de mikrober som trivs på det tillväxtmediet under dessa inkubationsförhållanden. Dessutom registrerar inte koloniträkning döda celler, ett viktigt övervägande när du behöver koncentrationen av celler i det ursprungliga provet.