Ett enzym är ett protein som katalyserar (ökar hastigheten på) kemiska reaktioner. Den optimala temperaturen för de flesta enzymer, eller temperaturen vid vilken enzymer bäst underlättar reaktioner, är mellan 35 och 40 grader Celsius. Att öka temperaturen inom detta fönster ökar reaktionshastigheten, eftersom det väcker molekyler och ökar hastigheten med vilken enzymer / reaktanter kolliderar och reagerar för att göra en produkt. Att öka temperaturen för mycket kan dock denaturera enzymet och förhindra att det fungerar alls.
Bestäm den optimala enzymtemperaturen genom att värma reaktionen med oändliga mängder och ta små prover av reaktionen för att bestämma när den maximala hastigheten för producerande produkt inträffar.
Välj en metod. Bestäm hur du ska mäta koncentrationen av din produkt på olika punkter i experimentet. Till exempel kan du mäta koncentrationen av många produkter med hjälp av en spektrofotometer och beräkna koncentrationen från absorbansen, eller genom att mäta fluorescens och beräkna koncentrationen från fluorescens.
Ställ in ditt experiment. Placera dina reaktanter och enzym i en liten behållare med lock, till exempel en scintillationsflaska. Reaktionen kommer att påbörjas. Placera scintillationsflaskan i ett större bägare med rumstemperaturvatten. Placera bägaren på en värmeplatta. Placera en termometer i bägaren. Detta gör att du kan mäta reaktionens temperatur vid olika punkter.
Ta ett 100 mikroliter prov av reaktionen vid rumstemperatur, cirka 25 grader Celsius. Slå på värmeplattan. Vid olika temperaturer mellan 30 och 40 grader Celsius (30,5, 31, 31,5 osv.) Ta 100 mikroliterprover av din reaktion.
Bestäm koncentrationen av din produkt vid varje temperatur. När temperaturen stiger över 40 grader kommer du att se en minskning av hastigheten vid vilken substratet omvandlas till produkt, eftersom enzymet denatureras. Den punkt vid vilken produkten produceras med maximal hastighet är den punkt vid vilken temperaturen är maximalt.