Det var inte så länge sedan att genteknik var saker av science fiction - vilket fick en organisme att växa med egenskaperna hos en annan. Sedan 1970-talet har genetiska manipulationstekniker dock kommit fram till den punkt där skarvning av främmande DNA i en organisme nästan är rutinmässigt. Till exempel kan gener för skadedjursresistens splitsas i majs, gener för framställning av humant insulin kan placeras i bakterier och gener för att härma humana cancer kan läggas i laboratoriemöss. Detaljerna i förfarandet är för komplicerade för att beskriva i en kort artikel, med många alternativ i varje steg, men den konceptuella konturen för den logiska stegsekvensen är ganska enkel.
Inkubera plasmid-DNA och DNA av intresse med ett restriktionsenzym. Restriktionsenzymet kommer att detektera en specifik sekvens av DNA-baser och skära DNA-skivan vid den punkten. Restriktionsenzymer härstammar från vissa bakterier försvarsmekanism mot virus. De är molekyler som kommer att snäva DNA där de detekterar ett givet basmönster.
Inkubera den utskurna plasmiden och de genomiska DNA-fragmenten med DNA-ligas. Med de flesta restriktionsenzymer kommer den cirkulära plasmiden och de genomiska DNA-fragmenten att ha komplementära "klibbiga ändar" som kommer att gripa vid varandra. DNA-ligas kommer sedan att limma bitarna ihop. Resultatet är ett gäng cirkulära plasmider som inkluderar delar av det genomiska DNA: t.
Sätt i plasmiderna i bakterier och odla bakterierna för att odla kolonier av organismer impregnerade med modifierat DNA. Om din plasmid har en antibiotikaresistent gen som värdbakterien saknar kan du automatiskt screena för framgångsrikt modifierade bakterier genom att odla bakterierna på antibiotikainfuserat tillväxtmedium. Det finns flera metoder för att införa plasmiderna i bakterierna, till exempel att använda en mikronål, applicera ett elektriskt fält för att öppna upp små hål i bakteriemembranet, eller bara sätta samman bakterier och plasmider i samma lösning och låta bakterierna ta upp dem naturligtvis.
Provceller från de olika kolonierna av modifierade bakterier. Tvätta de provade cellerna med en tvättmedelslösning för att bryta ner bakteriemembranen och extrahera DNA: t, värm det eller utsätt det för natriumhydroxid för att separera trådarna. Detta utsätter DNA-basssekvensen för analys.
Inkubera DNA med en lysrörssond. Lysa ett ultraviolett ljus på det inkuberade DNA och observera för fluorescens. Sonden består av en kort sekvens av DNA som matchar det genomiska DNA som du har infogat. Där sonden matchar det DNA som du letar efter kommer den att lysa när den är upplyst.
Isolera bakterierna från kolonierna som innehåller genen som du vill infoga. Duplicera ditt DNA genom att antingen låta bakteriekolonierna växa, eller extrahera DNA som du gjorde tidigare och duplicera det i en polymeraskedjereaktionsmaskin.