Innehåll
Flytande näringsbuljong används för att odla bakterier som Escherichia coli. Recept för denna buljong varierar beroende på bakteriesorten och närvaron av genetiska modifieringar, t.ex. antibiotikaresistens. Buljongen kan stelnas genom tillsats av agar, vilket gör det möjligt för bakterierna att bilda distinkta kolonier, medan de i flytande kultur helt enkelt sprider sig över volymen. Detta är en grundläggande men väsentlig teknik för avancerade metoder såsom genkloning eller mikrobiologiska analyser. Denna artikel antar att standardlaboratoriska Escherichia coli-stammar ska odlas på Luria buljong (LB) agarplattor (eller petriskålar).
Väg ut 10 gram trypton av bakteriekvalitet, 5 gram jästextrakt, 5 gram natriumklorid, 15 gram agar eller agaros och 1 ml 1N natriumhydroxid. Blanda dessa med en volym destillerat och autoklaverat sterilt vatten tills 1 liter medium erhålls. Autoklavera media i löst avslutade flaskor eller kolvar i 25 minuter. Låt svalna till cirka 50 grader innan du tillsätter reagens som kommer att förstöras vid hög värme, t.ex. antibiotika eller andra kosttillskott.
Låt det autoklaverade mediet svalna till 50 grader och inte lägre än 45 grader, eftersom agaren kommer att ställas in i behållaren innan den kan hällas. Skaffa sterila petriskålar och häll tillräckligt för att täcka hela ytan på plattan och åtminstone hälften av dess djup. Undvik överfyllning av plattorna och låt helst inte agaren komma i kontakt med överkanten på skålen. Låt plattorna stelna i en steril miljö (t.ex. under en laminär flödeshuva) genom att lämna locken av och till ett hörn av huven.
Torka plattorna. Även om plattorna kan användas så snart de är inställda kommer viss fukt att finnas på ytan av agaren, vilket förhindrar bakteriekolonier från att fästa tillräckligt. Därför är det bäst att torka plattorna innan du applicerar några bakterier, till exempel genom att lämna dem att sitta ute vid rumstemperatur under några dagar eller i en halvtimme under en laminär flödeshuva eller i en 37 grader Celsius inkubator.
Förvara plattorna. Torkade plattor bör staplas upp och ned (inverterade) på locken och återlämnas till originalförpackningen, tejpade fast och antingen lindade i folie för att skydda mot ljus eller i en lämplig behållare. Skriv alltid förberedelsedatumet på plattorna och undvik att använda om plattorna är mer än 2 månader gamla.