Innehåll
En spektrofotometer används för att bestämma koncentrationen av vissa föreningar, såsom protein, i en lösning. I allmänhet lyser ett ljus genom en kyvett fylld med ett prov. Mängden ljus som absorberas av provet mäts. Eftersom föreningar absorberar ljus i olika spektrala intervall måste rätt våglängd ställas in för analysen. Det finns många sätt att beräkna koncentrationen av okända prover genom spektrofotometri, men att använda referensstandarder ger bästa noggrannhet. Vidare indikerar standarder också om spektrofotometern inte fungerar eller andra problem med analysen.
Beräkning genom raka linjeekvationer
Analysera referensstandarder i början av analysen. Standarder är kända koncentrationer och används för att kalibrera utrustning och kontrollera noggrannhet. Alla prover bör falla inom standardernas arbetsområde. Om inte, kommer prover att behöva spädas ut eller koncentrationen av standarder ökas.
Gör ett spriddiagram eller linjediagram med standardkoncentrationer och absorptionsavläsningar. Koncentrationen kommer att vara på y-axeln, absorptionsförmågan på x-axeln. Till exempel är standarderna 1 ppm, 2,5 ppm och 5 ppm. Den givna absorptionsförmågan var 1 ppm = 0,25, 2,5 ppm = 0,5 och 5 ppm = 0,75.
Formatera trendlinjen för att visa en ekvation på diagrammet. Ekvationen visar formeln y = mx + b. Till exempel, med användning av standarderna i steg 2 är ekvationen y = .1224x + 0.1531. De flesta trendlinjer avlyssnas vid noll, men det beror på analysmetoden och R-kvadratvärdet.
Analysera okända prover och registrera absorptionsavläsningar.
Använd ekvationen (y = mx + b) för att bestämma koncentrationen av prover.
Förstå raklinjeekvation
Låt "Y" motsvara koncentrationen. Detta är vad som kommer att lösas för.
Låt "X" vara lika med provets absorptionsförmåga. Detta är absorbansen uppmätt med spektrofotometern.
Låt "" jämföra lutningen och "b" för att vara lika med y-skärningen. Båda ges, men om trendlinjen tvingades genom 0, kommer ”b” att vara 0.
Lös för koncentration. Använd exemplet i steg 3 och ersätt "x" som en given absorptionsförmåga på .563. Därför:
y = .1224 (.563) + 0,1531
y (koncentration) = .222011